1. Clasificación
La electroforesis en gel se divide en tipos verticales (incluidos geles en columna y geles en placa) y tipos horizontales (principalmente geles en placa) (Figura 6-18). Generalmente, la separación vertical es ligeramente superior a la horizontal, pero la preparación del gel horizontal tiene al menos cuatro ventajas: hay soporte debajo de todo el gel, lo que permite el uso de agarosa de baja concentración; es posible preparar placas de gel de agarosa de diferentes especificaciones; la preparación del gel y la carga de muestras son más convenientes; La cámara de electroforesis es fácil de construir y rentable. Dado que la electroforesis horizontal se realiza con la placa de gel de agarosa completamente sumergida aproximadamente 1 mm por debajo de la superficie del tampón de electroforesis, también se denomina electroforesis sumergida.
Tanque de electroforesis DYCP-31DN para electroforesis en gel de agarosa
2.Sistema de búfer
En la separación de ácidos nucleicos, la mayoría de los sistemas adoptan sistemas continuos. Los tampones de electroforesis comúnmente utilizados incluyen el tampón TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l ácido bórico, 0,0024 mol/l EDTA) y THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l). acetato de sodio, EDTA 0,0018 mol/l). Estos tampones generalmente se preparan como soluciones madre 10x y se diluyen a la concentración requerida cuando se usan. Las tasas de migración de ADN lineal y circular en gel de agarosa varían según el tampón utilizado. En el tampón THE, la tasa de migración del ADN lineal es mayor que la del ADN circular, mientras que en el tampón TBE ocurre lo contrario.
3.Preparación de gel de agarosa
(1) Preparación de gel de agarosa horizontal
(a) Prepare la concentración requerida de gel de agarosa utilizando 1x tampón de electroforesis.
(b) Calentar la agarosa hasta su completa disolución, ya sea en un baño de agua hirviendo, en un agitador magnético o en un microondas. Enfriar la solución de agarosa a 55°C y añadir colorante de bromuro de etidio (EB) hasta una concentración final de 0,5 μg/ml.
(c) Selle los bordes de las placas de vidrio o acrílico con una pequeña cantidad de gel de agarosa, agregue un peine y coloque los dientes del peine aproximadamente entre 0,5 y 1,0 mm por encima de la placa.
(d) Verter la solución de gel de agarosa derretida de forma continua en el molde de placa de vidrio o acrílico (el espesor depende del volumen de la muestra de ADN), evitando la introducción de burbujas de aire. Deja que solidifique de forma natural a temperatura ambiente.
(e) Retire con cuidado el peine después de la solidificación completa. Agregue una cantidad adecuada de tampón de electroforesis al tanque de gel, asegurándose de que la placa de gel esté sumergida aproximadamente 1 mm por debajo de la superficie del tampón de electroforesis.
(2) Preparación de gel de agarosa vertical
(a) Retire la grasa o los residuos de las placas de vidrio lavándolas con etanol.
(b) Coloque placas espaciadoras entre los protectores delantero y trasero, alinee los bordes de las placas espaciadoras con los protectores delantero y trasero y asegúrelos con abrazaderas.
(c) Agregue 2% de agarosa en tampón 1x entre los bordes de las placas espaciadoras para formar un tapón de agarosa de 1 cm de alto en el fondo de la cámara de fundición de gel.
(d) Vierta el gel de agarosa derretido en la concentración deseada, preparado en tampón 1x, en la cámara de gel hasta 1 cm por debajo de la parte superior.
(e) Inserte el peine, evitando atrapar burbujas de aire debajo de los dientes del peine. A veces, pueden aparecer arrugas en los dientes del peine durante el enfriamiento del gel de agarosa; en tales casos, simplemente agregue un poco de agarosa derretida en la parte superior para solidificarla.
(f) Retire el peine. Para evitar fugas de tampón en la ranura de carga, selle la conexión entre la placa de gel de agarosa y la cámara de electroforesis con agarosa al 2% y agregue la cantidad requerida de tampón.
(g) Agregue tampón de electroforesis 1x a la cámara de gel.
(h) Cargue con cuidado muestras de ADN en el gel de agarosa debajo del tampón.
Más información sobre los conocimientos básicos sobre la electroforesis en gel de agarosa, la compartiremos la próxima semana. Deseo que esta información sea útil para su experimento.
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Hora de publicación: 07-dic-2023