Introducción
La electroforesis en gel es una técnica fundamental en biología molecular, ampliamente utilizada para la separación de proteínas, ácidos nucleicos y otras macromoléculas. El control adecuado del volumen de la muestra, el voltaje y el tiempo de electroforesis es crucial para lograr resultados precisos y reproducibles.Nuestro colega de laboratorio ofrecemejores prácticas para gestionar estos parámetros durante la electroforesis en gel SDS-PAGE.
Productos de electroforesis en gel de Beijing Liuyi Biotechnology
Volumen de muestra: garantizar la coherencia
Al realizar electroforesis SDS-PAGE, el volumen de la muestra es un factor clave que puede afectar significativamente la resolución de sus resultados. Generalmente se recomienda cargar 10 µL de proteína total por pocillo. Para garantizar la coherencia y evitar la difusión de la muestra entre pocillos adyacentes, es importante cargar un volumen igual de tampón de carga 1x en los pocillos vacíos. Esta precaución ayuda a evitar la dispersión de muestras hacia los carriles vecinos, lo que puede ocurrir si el pozo se deja vacío.
Antes de cargar sus muestras, comience siempre agregando un marcador de peso molecular a un pocillo. Esto permite una fácil identificación de los tamaños de las proteínas después de la electroforesis.
Control de voltaje: equilibrio de velocidad y resolución
El voltaje aplicado durante la electroforesis afecta directamente tanto a la velocidad a la que las muestras migran a través del gel como a la resolución de la separación. Para SDS-PAGE, es aconsejable comenzar con un voltaje bajo de alrededor de 80 V. Este bajo voltaje inicial permite que las muestras migren lenta y uniformemente, concentrándolas en una banda afilada cuando ingresan al gel de separación.
Una vez que las muestras hayan entrado completamente en el gel separador, el voltaje se puede aumentar a 120 V. Este voltaje más alto acelera la migración, asegurando que las proteínas se separen eficientemente según su peso molecular. Es fundamental controlar el progreso del frente del colorante azul de bromofenol, que indica la finalización de la electroforesis. Para geles con una concentración del 10 al 12 %, normalmente son suficientes entre 80 y 90 minutos; sin embargo, para geles al 15%, es posible que necesite extender ligeramente el tiempo de ejecución.
Gestión del tiempo: saber cuándo parar
El tiempo es otro factor crítico en la electroforesis en gel. Hacer funcionar el gel durante un período demasiado largo o demasiado corto puede provocar una separación subóptima. La migración del tinte azul de bromofenol es un indicador útil: cuando llega al fondo del gel, suele ser el momento de detener la ejecución. Para geles estándar, como los del 10-12 %, normalmente es adecuada una duración de electroforesis de aproximadamente 80-90 minutos. Para geles con porcentajes más altos, como 15 %, el tiempo de ejecución debe ampliarse para garantizar la separación completa de las proteínas.
Gestión de buffers: reutilización y preparación de buffers
El tampón de electroforesis se puede reutilizar 1 o 2 veces, dependiendo de las condiciones específicas de su laboratorio. Sin embargo, para obtener resultados óptimos, se recomienda preparar un tampón 10x nuevo y diluirlo justo antes de su uso. Esto garantiza que el tampón mantenga su eficacia, lo que conduce a resultados de electroforesis más fiables.
Productos de electroforesis en gel de Beijing Liuyi Biotechnology
Al controlar cuidadosamente el volumen de la muestra, el voltaje y el tiempo de electroforesis, puede mejorar significativamente la precisión y reproducibilidad de los resultados de la electroforesis en gel. La implementación de estas mejores prácticas en su trabajo de laboratorio lo ayudará a lograr bandas más claras y distintas, lo que generará mejores datos para el análisis posterior.
Si tiene más métodos buenos para optimizar el experimento de electroforesis en gel, ¡bienvenido a discutirlo con nosotros!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) se ha especializado en la fabricación de instrumentos de electroforesis durante más de 50 años con nuestro propio equipo técnico profesional y centro de I+D. Contamos con una línea de producción completa y confiable desde el diseño hasta la inspección y el almacén, así como soporte de marketing. Nuestros productos principales son la celda de electroforesis (tanque/cámara), la fuente de alimentación de electroforesis, el transiluminador LED azul, el transiluminador UV, el sistema de análisis e imagen de gel, etc. También suministramos instrumentos de laboratorio como instrumentos de PCR, mezcladores de vórtice y centrífugas para laboratorio.
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Hora de publicación: 20-ago-2024