Preparación de gel de agarosa para electroforesis.
Nota: ¡Use siempre guantes desechables!
Instrucciones paso a paso
Pesaje de polvo de agarosa:uSe pesa papel y una balanza electrónica para medir 0,3 g de polvo de agarosa (basado en un sistema de 30 ml).
Preparación del tampón TBST:pRepare 30 ml de tampón TBST 1x en un matraz Erlenmeyer de 100 ml.
Disolver el polvo de agarosa:pVierta el polvo de agarosa en el tampón TBST y agite bien.Ponlos ena un microondas y calentar (generalmente durante 50 segundos, cubierto con papel de aluminio) hasta que se disuelva por completo.
Enfriamiento y adición de nucleasa:uUtilice guantes para sacar la mezcla del microondas y déjela enfriar un poco en agua fría hasta que esté tibia (aproximadamente 60°C). Agregue 2 µl de nucleasa (sustituto de Eb) mientras agita para mezclar bien.
Preparando el molde de gel:
- Cmagro y seco elbandeja de gel y dispositivo de fundición de geldel tanque de electroforesis.
- Pencaje el gelbandejaen el tanque interior e inserte el peine en una posición fija.
- Mezcle la solución de gel de agarosa, enfriada a aproximadamente 65°C, y viértala con cuidado sobre elbandeja de gelen eldispositivo de fundición de gel, extendiéndolo lentamente hasta formar una capa uniforme de gel sobre la placa de vidrio.
- Déjelo reposar a temperatura ambiente hasta que el gel se solidifique por completo.
- Retire con cuidado el peine verticalmente y retire la cinta.
- colocar el gelbandejaen el tanque de electroforesis.
Importante: Asegúrese de que no haya burbujas de aire en el área de los dientes del peine. La superficie del líquido debe ser lisa y sin ondulaciones.
Ejecutar el gel
Cargando el gel
Después de que el gel se solidifique, colóquelo en el tanque de electroforesis y vierta el tampón de electroforesis hasta que el gel esté sumergido.
Preparación de muestras
- Saque el marcador y el tampón de carga del frigorífico.
- Agregue 6 µl de tampón de carga a las muestras y mezcle bien.
- Usando una micropipeta, cargue lentamente las muestras en los pocillos grandes del gel (tenga cuidado de no perforar el gel y no dispensar todo el volumen para evitar burbujas de aire).
- Cargue el marcador en cualquiera de los pocillos pequeños (recuerde su posición).
Inicio de la electroforesis
- Cubra el tanque de electroforesis e inicie la electroforesis inmediatamente después de cargar el gel.
- Establezca el voltaje en 60-100 V. Las muestras migrarán del electrodo negativo (negro) al electrodo positivo (rojo).
- Un voltaje más alto acorta el rango de separación efectivo del gel de agarosa.
- Detenga la electroforesis cuando el tinte azul de bromofenol alcance aproximadamente 1 cm desde el borde inferior de la placa de gel.
Observación de resultados
Después de separar las bandas, detenga la electroforesis, saque el gel y detecte y fotografíe directamente.
Utilice un sistema de imágenes de gel para fotografiar y observar las bandas (verifique si hay bandas para el marcador o las muestras).
Después de obtener el mapa de la banda de gel, busque el marcador. ¡Según el marcador, puedes determinar las bandas objetivo!
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Hora de publicación: 09-ago-2024