Los pasos de operación para el aparato Trans Blot semiseco DYCP-40C

El sistema de transferencia semiseca DYCP-40C se utiliza junto con la fuente de alimentación de electroforesis para transferir las proteínas de los geles de poliacrilamida a membranas como membranas de nitrocelulosa, membranas de nailon y membranas de PVDF. La transferencia semiseca se realiza con electrodos de placa de grafito en una configuración horizontal, intercalando un gel y una membrana entre hojas de papel de filtro empapado en tampón que funcionan como depósito de iones. Durante la transferencia electroforética, las moléculas cargadas negativamente migran fuera del gel y se dirigen hacia el electrodo positivo, donde se depositan en la membrana. Los electrodos de placa, separados únicamente por el gel y la pila de papel de filtro, proporcionan una alta intensidad de campo (V/cm) a través del gel, llevando a cabo transferencias rápidas y muy eficientes. La superficie de transferencia de la celda de electroforesis DYCP – 40C más pequeña es de 150 × 150 (mm), adecuada para transferir geles estándar, incluidos los de las celdas de electroforesis DYCZ-24DN y DYCZ-24EN.

Aprendamos más sobre el funcionamiento de este aparato de transferencia trans semiseca.

Materiales, instrumentos para operar DYCP-40C.
Fuente de alimentación para electroforesis DYY-6C, aparato de transferencia trans semiseca DYCP-40C, solución tampón y recipientes para solución tampón. etc.

Pasos de operación
1. Coloque el gel con placas de vidrio en la solución tampón de transferencia.

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2. Mide el tamaño del gel.

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3.Prepare 3 trozos de papel de filtro según el tamaño del gel, y el tamaño del papel de filtro debe ser un poco más grande que el tamaño del gel; Aquí utilizamos papel de filtro Whatman;

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4.Coloque 3 trozos de papel de filtro en la solución tampón lentamente y deje que el papel de filtro se sumerja por completo en el tampón y evite que se formen burbujas de aire;

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5.Preparar y cortar membrana de nitrocelulosa según el tamaño del gel y papel de filtro; el tamaño de la membrana de nitrocelulosa debe ser mayor que el tamaño del gel y del papel de filtro;

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6.Coloque la membrana de nitrocelulosa en la solución tampón;

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7.Retire las 3 piezas de papel de filtro y deje caer la solución tampón adicional hasta que no caiga solución tampón de la membrana; y luego coloque el papel de filtro en el fondo del DYCP-40C;

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8.Tome el gel de las placas de vidrio, limpie suavemente el gel de apilamiento y coloque el gel en la solución tampón;

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9.Coloque el gel sobre el papel de filtro, comience desde un extremo del gel para evitar las burbujas de aire;

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10.Utilice una herramienta adecuada para eliminar las burbujas de aire entre el gel y el papel de filtro.

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11.Cubra la membrana de nitrocelulosa sobre el gel, con el lado rugoso hacia el gel. Y luego utilice una herramienta adecuada para eliminar las burbujas de aire entre la membrana y el gel. Coloque 3 trozos de papel de filtro sobre la membrana. Aún es necesario utilizar una herramienta adecuada para eliminar las burbujas de aire entre el papel de filtro y la membrana.

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12.Cubra la tapa y configure los parámetros de funcionamiento de la electroforesis, la corriente constante de 80 mA;

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13.Se realiza la electroforesis. Obtenemos el resultado de la siguiente manera;

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Hora de publicación: 04-abr-2023