¿Qué es la electroforesis en gel de poliacrilamida?

Electroforesis en gel de poliacrilamida

La electroforesis en gel es una técnica fundamental en los laboratorios de todas las disciplinas biológicas, que permite la separación de macromoléculas como ADN, ARN y proteínas. Diferentes medios y mecanismos de separación permiten separar subconjuntos de estas moléculas de manera más efectiva aprovechando sus características físicas. Para las proteínas en particular, la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) suele ser la técnica de elección.

PAGE es una técnica que separa macromoléculas como proteínas en función de su movilidad electroforética, es decir, la capacidad de los analitos de moverse hacia un electrodo de carga opuesta. En PAGE, esto está determinado por la carga, el tamaño (peso molecular) y la forma de la molécula. Los analitos se mueven a través de los poros formados en el gel de poliacrilamida. A diferencia del ADN y el ARN, las proteínas varían en su carga según los aminoácidos incorporados, lo que puede influir en su funcionamiento. Las cadenas de aminoácidos también pueden formar estructuras secundarias que afectan su tamaño aparente y, en consecuencia, su capacidad para moverse a través de los poros. Por lo tanto, a veces puede ser deseable desnaturalizar las proteínas antes de la electroforesis para linealizarlas si se requiere una estimación más precisa del tamaño.

PÁGINA SDS

La electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio es una técnica utilizada para separar moléculas de proteínas con masas de 5 a 250 kDa. Las proteínas se separan únicamente en función de su peso molecular. En la preparación de geles se añade dodecilsulfato de sodio, un tensioactivo aniónico que enmascara las cargas intrínsecas de las muestras de proteínas y les da una relación carga-masa similar. En palabras simples, desnaturaliza las proteínas y les da una carga negativa.

PÁGINA nativa

Native PAGE es una técnica que utiliza geles no desnaturalizados para la separación de proteínas. A diferencia de SDS PAGE, no se añade ningún agente desnaturalizante en la preparación de geles. Como resultado, la separación de proteínas se produce en función de la carga y el tamaño de las proteínas. En esta técnica, la conformación, el plegamiento y las cadenas de aminoácidos de las proteínas son los factores de los que depende la separación. Las proteínas no se dañan en este proceso y pueden recuperarse una vez completada la separación.

¿Cómo funciona la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE)?

El principio básico de PAGE es separar analitos haciéndolos pasar a través de los poros de un gel de poliacrilamida mediante una corriente eléctrica. Para lograrlo, se polimeriza una mezcla de acrilamida y bisacrilamida (poliacrilamida) mediante la adición de persulfato de amonio (APS). La reacción, que está catalizada por tetrametiletilendiamina (TEMED), forma una estructura en forma de red con poros a través de los cuales los analitos pueden moverse (Figura 2). Cuanto mayor sea el porcentaje de acrilamida total incluido en el gel, menor será el tamaño de los poros y, por tanto, más pequeñas serán las proteínas que podrán pasar. La proporción de acrilamida a bisacrilamida también afectará el tamaño de los poros, pero a menudo se mantiene constante. Los tamaños de poro más pequeños también reducen la velocidad a la que las proteínas pequeñas pueden moverse a través del gel, mejorando su resolución y evitando que se escapen rápidamente hacia el tampón cuando se aplica corriente.

Equipo para electroforesis en gel de poliacrilamida

Celda de electroforesis en gel (tanque/cámara)
El tanque de gel para electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) es diferente del tanque de gel de agarosa. El tanque de gel de agarosa es horizontal, mientras que el tanque de PAGE es vertical. Mediante una celda de electroforesis vertical (tanque/cámara), se vierte un gel fino (normalmente de 1,0 mm o 1,5 mm) entre dos placas de vidrio y se monta de modo que la parte inferior del gel quede sumergida en un tampón en una cámara y la parte superior esté sumergida en un tampón. en otra cámara. Cuando se aplica corriente, una pequeña cantidad de tampón migra a través del gel desde la cámara superior a la cámara inferior. Con abrazaderas fuertes para garantizar que el conjunto se mantenga en posición vertical, el equipo facilita recorridos rápidos del gel con un enfriamiento uniforme, lo que da como resultado bandas distintas.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fabrica una variedad de tamaños de células de electroforesis en gel de poliacrilamida (tanques/cámaras). Los modelos DYCZ-20C y DYCZ-20G son células de electroforesis vertical (tanques/cámaras) para análisis de secuenciación de ADN. Algunas de las celdas de electroforesis vertical (tanques/cámaras) son compatibles con el sistema de transferencia, como el modelo DYCZ-24DN, DYCZ-25D y DYCZ-25E son compatibles con el sistema de transferencia Western modelo DYCZ-40D, DYCZ-40G y DYCZ-40F. que se utilizan para transferir la molécula de proteína del gel a la membrana. Después de la electroforesis SDS-PAGE, la transferencia Western es una técnica para detectar una proteína específica en una mezcla de proteínas. Puede elegir estos sistemas de transferencia según los requisitos experimentales.

Fuente de alimentación de electroforesis
Para proporcionar electricidad para hacer funcionar el gel, necesitará una fuente de alimentación de electroforesis. En Liuyi Biotechnology ofrecemos una gama de fuentes de alimentación de electroforesis para todas las aplicaciones. Los modelos DYY-12 y DYY-12C con voltaje y corriente altos y estables pueden cumplir con los requisitos de electroforesis de alto voltaje. Tiene la función de stand, cronometraje, VH y aplicación paso a paso. Son ideales para aplicaciones de electroforesis de secuenciación de ADN y IEF. Para aplicaciones generales de electroforesis de proteínas y ADN, tenemos los modelos DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, etc., que también son fuentes de alimentación de gran venta con celdas de electroforesis (tanques/cámaras). Estos se pueden utilizar para aplicaciones de electroforesis de voltaje medio y bajo, como para uso en laboratorios escolares, laboratorios de hospitales, etc. Más modelos de fuentes de alimentación, visite nuestro sitio web.

La marca Liuyi tiene más de 50 años de historia en China y la empresa puede ofrecer productos estables y de alta calidad en todo el mundo. ¡A través de años de desarrollo, es digno de su elección!

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Referencias para ¿Qué es la electroforesis en gel de poliacrilamida?
1. Karen Steward PhD Electroforesis en gel de poliacrilamida, cómo funciona, variantes técnicas y sus aplicaciones