La electroforesis en gel es uno de los principales métodos utilizados en biología molecular para el análisis de ADN.Este método implica la migración de fragmentos de ADN a través de un gel, donde se separan según su tamaño o forma.Sin embargo, ¿alguna vez ha encontrado algún error durante sus experimentos de electroforesis, como bandas manchadas en el gel de agarosa o sin bandas en el gel?¿Cuál podría ser la causa de estos errores?
Nuestros técnicos han resumido aquí algunas soluciones de problemas para su referencia.
1. Bandas untadas sobre gel de agarosa.
●El ADN fue degradado.Evite la contaminación por nucleasas.
● El tampón de electroforesis no está fresco.Después del uso repetido del tampón de electroforesis, la fuerza iónica disminuye y su valor de pH aumenta, por lo que la capacidad del tampón se debilita, lo que afecta el efecto de la electroforesis.Se recomienda reemplazar el tampón de electroforesis con frecuencia.
● Se utilizaron condiciones de electroforesis inadecuadas.No permita que el voltaje supere los 20 V/cm y mantenga una temperatura <30 °C durante la electroforesis.Para la electroforesis de la cadena de ADN gigante, la temperatura debe ser <15 °C. Compruebe que el tampón de electroforesis tenga suficiente capacidad de tampón.
● Se cargó demasiado ADN en el gel.Disminuir la cantidad de ADN.
● Demasiada sal en el ADN.Utilice precipitación con etanol para eliminar el exceso de sales con antelación.
● El ADN estaba contaminado con proteínas.Utilice extracciones con fenol para eliminar las proteínas con antelación.
● El ADN fue desnaturalizado.No calentar antes de la electroforesis.Diluir el ADN en tampón con NaCl 20 mM.
2. Anomalías en la migración de bandas de ADN.
● Renaturalización del sitio COS del fragmento λHind III.Calentar el ADN durante 5 minutos a 65 °C antes de la electroforesis y luego enfriarlo en una unidad de hielo durante 5 minutos.
● Se utilizaron condiciones de electroforesis inadecuadas.No permita que el voltaje supere los 20 V/cm y mantenga una temperatura <30 °C durante la electroforesis.Compruebe que el tampón de electroforesis tenga suficiente capacidad de tampón.
● El ADN fue desnaturalizado.No calentar antes de la electroforesis.Diluir el ADN en tampón con NaCl 20 mM.
3. Bandas de ADN débiles o nulas en gel de agarosa
● Había una cantidad o concentración insuficiente de ADN cargado en el gel.Aumenta la cantidad de ADN.La electroforesis en gel de poliacrilamida es ligeramente más sensible que la electroforesis en agarosa y la carga de muestra se puede reducir adecuadamente.
● El ADN fue degradado.Evite la contaminación por nucleasas.
● El ADN se separó del gel por electroforesis.Realice la electroforesis en el gel durante menos tiempo, use un voltaje más bajo o use un porcentaje de gel más alto.
● Se utilizó una fuente de luz W inadecuada para la visualización del ADN teñido con bromuro de etidio.Utilice una luz W de longitud de onda corta (254 nm) para obtener una mayor sensibilidad.
4. Faltan bandas de ADN
●El ADN de pequeño tamaño se separó del gel mediante electroforesis.Realice la electroforesis en el gel durante menos tiempo, use un voltaje más bajo o use un porcentaje de gel más alto.
● Difícil distinguir las bandas de ADN de moléculas similares.Aumente el tiempo de electroforesis y verifique la concentración.del gel para asegurarse de que se utilizará el porcentaje correcto de gel.
● El ADN fue desnaturalizado.No calentar antes de la electroforesis.Diluir el ADN en tampón con NaCl 20 mM.
● Las cadenas de ADN son enormes y la electroforesis en gel convencional no es adecuada.Analizar en electroforesis en gel de pulso.¿Qué otros problemas ha tenido con la electroforesis en gel de agarosa?Investigaremos más para guías en el futuro.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) es una empresa especializada que se centra en productos relacionados con la electroforesis en China.Su historia comienza en 1970, cuando China aún no había entrado en el período de reforma y apertura.A través de años de desarrollo, Liuyi Bitotech tiene su propia marca, conocida como la marca Liuyi en el mercado nacional de productos de electroforesis.
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Hora de publicación: 09-mayo-2022