La electroforesis en gel de ADN es una técnica común de biología molecular que se utiliza para separar y analizar fragmentos de ADN en función de su tamaño.El proceso implica cargar fragmentos de ADN de diferentes tamaños en un gel hecho de agarosa, un carbohidrato que se encuentra en las algas rojas.
Preparar y colar el gel de agarosa.
- Disolver la agarosa en una cantidad adecuada de tampón de electroforesis.La concentración del gel está determinada por la relación masa-volumen, como 1 g de agarosa en 100ml de tampón para un gel al 1%.
- Calentar la mezcla en el microondas, girando el recipiente para asegurar la completa disolución de la agarosa.
- Agregue bromuro de etidio a la solución de gel hasta una concentración final de 0,5mg/ ml.El bromuro de etidio se intercala entre pares de bases de ADN adyacentes y emite fluorescencia naranja bajo luz ultravioleta.Tenga en cuenta que el bromuro de etidio es un carcinógeno, por lo que su manipulación requiere medidas de seguridad adecuadas, como el uso de guantes.
- Enfríe la solución de gel en un baño de agua para evitar que la bandeja de gel se deforme debido a las altas temperaturas.
- Coloque un peine en la solución de gel para formar pocillos de muestra.Seleccione peines adecuados para la cantidad de muestra de ADN que cargará.Vierta la solución de gel de agarosa en elbandeja de gely dejar solidificar a temperatura ambiente.
- Una vez que el gel se haya solidificado, retira el peine.Si no vas a usar el gel inmediatamente, envuélvelo en una envoltura de plástico y guárdalo a 4 ℃ hasta que lo necesites.
Preparar y ejecutar el gel.
Antes de iniciar la electroforesis, mezcle la muestra de ADN con el tampón de carga.El tampón de carga suele ser seis veces más concentrado y ayuda a que la muestra se hunda hasta el fondo de los pocillos y siga el movimiento durante la electroforesis.
Configure la fuente de alimentación al voltaje especificado.
Agregue suficiente tampón de electroforesis al tanque de gel para cubrir la superficie del gel.Asegurarlas conexiones correctas de los electrodos.
Cargue la muestra de ADN y los marcadores de peso molecular en los pocillos del gel.
Encienda la fuente de alimentación para iniciar la electroforesis.
Observando fragmentos de ADN separados
Después de la electroforesis, apague la fuente de alimentación y retire el gel.
Utilice una fuente de luz ultravioleta para iluminar el gel;Los fragmentos de ADN aparecerán como bandas fluorescentes de color naranja.
Documente la imagen del gel para analizar los fragmentos de ADN separados.
Después del experimento, asegúrese de la eliminación adecuada del gel y el tampón de electroforesis, siguiendo las pautas del laboratorio.Utilice siempre guantes cuando manipule geles y tampones que contengan bromuro de etidio para protegerse contra la exposición a esta sustancia peligrosa.
La electroforesis en gel de ADN se usa ampliamente en biología molecular y genética para estimar el tamaño de las moléculas de ADN, separar fragmentos de ADN, detectar mutaciones genéticas y tomar huellas dactilares de ADN, entre otras aplicaciones.Es una técnica experimental sencilla y eficaz que ayuda a comprender la composición y características de las muestras de ADN.
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Hora de publicación: 08-ago-2023